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溫育是ELISA測定中影響測定勝敗zui為要害的一個要素。也是zui簡略出現(xiàn)問題的一個過程。通常目前國內(nèi)ELISA產(chǎn)品試劑盒的反應溫育時間為37 ℃ 30分鐘～1小時，進口ELISA試劑盒則通常為37 ℃ 1～2小時才華有較*的結合，低于1小時，或許會影響測定下限。因此，關于溫育，在實踐測定操作中必定要留意以下幾點：
（1）要保證在設定的溫度下有滿意的反應時間。一般來說，加完樣本和/或反應試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃，需求必定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時間或許還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人留意這個問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開端計時，這樣就很簡略構成實踐測定中溫育時間不行，弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南邊的血站同行提出了一個問題，就是在每一年的冬天總有那么一個多月的時間，在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中，測定由衛(wèi)生部臨床查驗中心供應的1 ng/ml弱陽性樣本時，總是測不出來，不知原因為何？這或許就與南邊冬天室內(nèi)溫度較低有關，此時微孔板轉入溫箱后37 ℃溫育時間不行，致使弱陽性樣本測定為陰性。因此，為保證37 ℃下滿意的溫育時間，臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(jié)（不同室溫下）微孔板從室溫拿至溫箱后需求多長時間孔內(nèi)溫度才華達到37 ℃，然后恰當延伸板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是，用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。
（2）溫育溫度的挑選。在有的ELISA試劑盒的闡明書中，指出溫育溫度可有兩種，例如，一種是37 ℃下1小時，另一種則為43 ℃下45分鐘。從免疫測定的抗原抗體反應的實質(zhì)來看，在較低的溫度下反應較長的時間zui為*。如2～8 ℃下反應24小時。較高的反應溫度，因為分子運動的加憐惜，反應時間縮短，這一點對分子含量較多的強陽性樣本的測定沒有問題，但對分子含量少的弱陽性樣本則有漏檢的或許。因此，咱們主張在臨床ELISA測定中盡量運用較低溫育溫度較長反應時間的條件。
（3）“邊緣效應”的打掃。曾經(jīng)在運用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應”，即外周孔顯色較中心孔深，發(fā)生這種“邊緣效應”的原因或許為 96孔板周孔與中心孔外表或熱力學特征的不同。但有研討證實在溫育中的熱力學梯度或許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的慣例 ELISA測定中，將板從室溫（通常在25 ℃左右）置于37 ℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間或許存在一熱力學梯度。因此運用水浴或在將反應溶液參加至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37 ℃），就可以很簡略地打掃“邊緣效應”，而且可進步測定的重復性。
                             
    總而言之，在ELISA測定中，要保證好的測定效果，可選用上述簡略方法來保證溫育條件，即盡量選用水浴，溫育中讓微孔板浮于水面上，或?qū)⒔杆纳巢挤湃胍淮箫埡兄谐梢粷窈校庞跍叵渲?，這樣就會因為板條孔底部直接與37 ℃水或濕布的接觸，以及水浴箱或濕盒內(nèi)的高溫度，而使反應溶液的溫度敏捷與溫室平衡。