今天我們就談ELISA試劑盒中陰性本底的形成原因。酶聯(lián)固相免疫實(shí)驗(yàn)中，尤其在簡介ELISA試劑盒法中，經(jīng)常會碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標(biāo)本的本底值差異較大。本底或稱背景，是ELISA試劑盒中的非特異性顯色。底物未經(jīng)過酶作用而呈現(xiàn)的顏色稱為空白。底物液如配制不當(dāng)會出現(xiàn)一定的空白值。這個(gè)空白值只要不太高（A＜0.05），可從個(gè)測定值中減除，并不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這里研究的是不含待測抗原或抗體的陰性標(biāo)本在ELISA試劑盒中出現(xiàn)的本底。從理論上講，只有陽性標(biāo)本zui終才能引出顯色反應(yīng)，在以下情況
因此除在包被時(shí)有目的地使抗原或抗體吸附在載體上，在ELISA試劑盒各個(gè)步驟中均有可能發(fā)生干擾物質(zhì)的吸附，使zui終產(chǎn)生與受檢抗原-抗體反應(yīng)無關(guān)的顯色，這是形成本底的主要原因。
在酶免疫測定中，ELISA試劑盒的特點(diǎn)是利用固相載體作為分離游離和結(jié)合的酶結(jié)合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原會抗體形成固相抗原或固相抗體，即免疫吸附劑。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團(tuán)，通過疏水鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合。之中吸附式物理性的非特異性吸附，雖然蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等對吸附的量有一定的影響，但總的來說各種蛋白質(zhì)均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此需要更加專業(yè)的儀器。新BioCel裝置可以將細(xì)胞均勻分裝在多孔板中，ELISA試劑盒并執(zhí)行一系列倒去孵育液，加入新鮮溶液的操作。許多中間過程，包括細(xì)胞培養(yǎng)基的倒去和吸光度的檢測都可以自動進(jìn)行。
加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
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